dna提取的基本步骤

DNA提取的基本步骤

DNA提取是从生物样本中分离纯化DNA的过程，广泛应用于医学诊断、法医学、遗传研究等领域其核心步骤可分为以下四步：

1.细胞裂解（破坏细胞结构）

目的：打破细胞膜/壁，释放DNA和细胞内容物

方法：

物理法：研磨（植物/骨骼）

超声破碎、冻融循环

化学法：添加裂解缓冲液（含SDS等去污剂溶解脂质膜）

酶解法：蛋白酶K消化蛋白质（尤其适用于含细胞壁的细菌/真菌）

关键点：不同样本需定制方案（如血液用温和裂解，植物需加强机械破碎）

2.去除杂质（分离DNA与细胞碎片）

目的：去除蛋白质、脂质、RNA等污染物

方法：

离心分离：高速离心沉淀细胞碎片，DNA留存上清液

有机溶剂萃取：酚-氯仿混合液使蛋白质变性，分层后DNA位于水相

吸附纯化：硅胶膜/磁珠特异性结合DNA，冲洗去除杂质（现代试剂盒常用）

酶处理：RNase降解RNA

关键点：酚-氯仿法效率高但有毒性，硅胶柱法更安全快捷

3.DNA沉淀（浓缩与收集）

目的：将DNA从溶液中析出

方法：

盐离子中和：添加醋酸钠（NaAc）或氯化钠，中和DNA负电荷

酒精沉淀：加入冰乙醇或异丙醇，DNA因不溶于醇类形成白色絮状沉淀

低温辅助：-20°C冷冻增强沉淀效果

关键点：高盐浓度和低温可提升沉淀效率

4.纯化与保存（获取纯净DNA）

目的：去除残留溶剂，获得高纯度DNA

方法：

洗涤：70%乙醇冲洗沉淀，去除盐分

溶解：将DNA重悬于TE缓冲液（保护DNA稳定性）或超纯水

验证：

凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳观察条带

光度计检测：A260/A280比值评估纯度（1.8-2.0为佳）

保存：-20°C或-80°C长期储存

不同样本的特殊处理

血液/体液：直接裂解，避免DNA酶降解

植物/真菌：需加强机械破碎及去除多糖

骨骼/牙齿：表面去污、研磨成粉，延长蛋白酶K消化时间

福尔马林样本：需特殊处理逆转交联

DNA提取的意义

DNA提取是分子生物学的基石，支撑以下应用：

医学：疾病基因检测、新生儿筛查

法医学：亲子鉴定、犯罪现场DNA分析

科研：基因工程、物种进化研究

技术演进小知识

自1869年米歇尔首次分离DNA后，技术历经革新：

19世纪：粗提物含大量杂质

1980s：酚-氯仿法成为金标准

21世纪：商用试剂盒（硅胶柱/磁珠法）实现高通量、自动化

通过上述步骤，科学家得以从微小样本中获取生命的“密码手册”，推动生命科学领域的飞速发展