DNA的提取与鉴定主要基于其物理化学特性：
溶解度差异：DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。当浓度为0.14 mol/L时，DNA溶解度最低，易析出；而浓度高于或低于此值时，溶解度升高。
酒精沉淀：DNA不溶于高浓度酒精（如95%冷酒精），而蛋白质等杂质可溶，因此可通过酒精分离纯化DNA。
耐高温性：DNA在80℃以上仍稳定，而蛋白质会变性沉淀，可通过高温处理去除杂质。
鉴定反应：DNA在沸水浴条件下与二苯胺试剂反应生成蓝色复合物，用于定性检测。
实验材料选择
动物材料：鸡血细胞液（红细胞含细胞核，DNA含量高），需加入抗凝剂（如柠檬酸钠）防止血液凝固。
植物材料：洋葱、菜花等，需用洗涤剂破坏细胞膜，食盐（NaCl）辅助溶解DNA。其他工具：研钵、纱布、离心管、酒精灯等，避免使用金属器皿以防DNA断裂。
实验步骤详解
破碎细胞，释放DNA
动物细胞：加入蒸馏水使细胞吸水涨破，离心后取上清液。
植物细胞：研磨后加入洗涤剂（如SDS）溶解细胞膜，释放DNA。
去除杂质
调节NaCl浓度：通过改变NaCl浓度（如2 mol/L溶解DNA，0.14 mol/L析出DNA）反复纯化。
酶解法：加入嫩肉粉（含蛋白酶）分解蛋白质。
高温处理：60-80℃水浴后过滤，去除变性的蛋白质。
DNA析出
向滤液中缓慢加入预冷的95%酒精，DNA形成白色絮状物析出，用玻璃棒轻柔卷取。
DNA鉴定
取DNA溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴5-10分钟，若溶液变蓝则证明DNA存在。
关键注意事项
材料处理：植物细胞需充分研磨；动物血液需新鲜且抗凝
操作轻柔：搅拌和转移时避免DNA分子断裂。
试剂配制：二苯胺试剂需现配现用，酒精需预冷以提高沉淀效率。
纯度提升：多次溶解-析出DNA可减少杂质（如RNA、多糖）。
实验意义与应用
该实验是分子生物学的基础操作，广泛应用于基因测序、疾病诊断（如产前STR检测）、法医学等领域。通过改进方法（如使用CTAB或商品化试剂盒），可进一步提升DNA纯度。
常见问题解答
为何选择鸡血？红细胞含细胞核且DNA含量高，易于提取。
洗涤剂的作用？破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
酒精为何需冷却？低温降低DNA溶解度并减少杂质溶解。
通过以上步骤，即可从细胞中粗提取DNA并完成鉴定，为后续研究提供基础材料。
客服