一、DNA提取的核心步骤
DNA提取是从生物样本中分离纯化DNA的过程，其核心步骤包括：
样本采集与处理
样本类型：血液、唾液、口腔拭子、毛发、植物组织等均可作为样本样本需低温保存，防止DNA降解（如血液需加抗凝剂）
预处理：植物样本需研磨破碎细胞壁；动物细胞需离心分离（如鸡血去除红细胞）
细胞裂解（释放DNA）
物理法：研磨、超声破碎或冻融循环，破坏细胞膜/壁
化学法：使用裂解缓冲液（含SDS、Triton X-100等表面活性剂）溶解脂质膜，释放DNA
酶解法：添加蛋白酶K分解结合DNA的蛋白质，提高提取效率
去除杂质
蛋白质去除：
盐析法：高盐浓度使蛋白质沉淀
有机溶剂法：酚/氯仿抽提去除蛋白质（注意：酚有毒性，需谨慎）
硅胶柱法：通过离心柱吸附DNA，洗脱蛋白质（更安全高效）
RNA及其他杂质：加入RNase降解RNA，离心去除多糖、脂质
DNA沉淀与纯化
乙醇/异丙醇沉淀：加入冷乙醇使DNA絮状析出，玻璃棒缠绕收集或离心获取沉淀
纯化：沉淀用70%乙醇洗涤去盐，干燥后溶解于TE缓冲液或无菌水
DNA质量检测
浓度与纯度：紫外分光光度法测量A260/A280比值（1.8–2.0为纯净DNA，低于1.8提示蛋白质污染）
完整性：琼脂糖凝胶电泳观察DNA条带是否完整（无降解）
关键提示：不同样本需调整方法例如植物含多酚，需添加PVP（聚乙烯吡咯烷酮）结合杂质；法医样本可能含PCR抑制剂（如血红蛋白），需特殊纯化
二、DNA鉴定的主要方法
鉴定目的是确认DNA的身份或序列特征，常用技术包括：
PCR扩增
原理：通过温度循环（变性-退火-延伸）扩增目标DNA片段，需引物、Taq酶、dNTP
应用：微量DNA（如犯罪现场样本）需扩增后鉴定
凝胶电泳分析
琼脂糖凝胶电泳：分离DNA片段，通过条带位置判断大小（如亲子鉴定中的STR片段）
结果观察：EB或SYBR染色后紫外灯下显影
测序与分型
Sanger测序：传统方法确定DNA序列
高通量测序（NGS）：用于全基因组分析
STR分型：法医学中通过短串联重复序列判定个体身份（如DNA指纹）
化学显色法
二苯胺显色：DNA在酸性条件下与二苯胺反应呈蓝色，用于粗提物定性检测
三、技术选择与注意事项
方法对比
方法优点缺点
有机溶剂抽提成本低有毒、步骤繁琐
硅胶柱法快速、标准化试剂盒成本较高
Chelex树脂法适合微量样本DNA纯度较低
操作规范
防污染：使用无菌器材、戴手套/口罩，避免交叉污染
防降解：操作低温进行，避免DNA酶污染
质量控制：每次实验设阳性/阴性对照
四、应用领域
法医学：犯罪现场DNA鉴定、亲子关系确认
医学：遗传病诊断、病原体检测（如病毒DNA）
生物学研究：物种鉴定、基因克隆
未来发展：新型技术如微流控芯片可自动化提取，便携式PCR仪实现现场快速鉴定
结语
DNA提取与鉴定是分子生物学的基石技术，其步骤需根据样本类型、实验目的灵活调整严谨的操作和纯度的把控是结果可靠的关键，而持续的技术革新正推动其在精准医疗、公共安全等领域发挥更大作用
客服