DNA提取是分子生物学的基础技术，其核心在于通过化学试剂破坏细胞结构、分离DNA并去除杂质细胞提取液（或称裂解缓冲液）中的各成分协同作用，确保DNA的完整性和纯度以下是关键物质的功能解析：
1.裂解剂：破坏细胞结构
表面活性剂（如SDS）：
溶解细胞膜和核膜的脂质层，使细胞内容物释放SDS还能变性蛋白质，使其与DNA分离
类似成分如Triton X-100也有相同作用
蛋白酶（如蛋白酶K）：
分解包裹DNA的组蛋白和核蛋白，防止蛋白质污染
2.稳定剂：保护DNA完整性
EDTA（乙二胺四乙酸）：
螯合镁离子（Mg²⁺）、钙离子（Ca²⁺）等金属离子，抑制DNA酶（DNase）的活性，防止DNA降解
Tris-HCl缓冲液：
维持溶液pH稳定（通常pH 8.0），避免酸碱波动破坏DNA结构
3.盐类：调节DNA溶解性与沉淀
氯化钠（NaCl）或醋酸钠（NaAc）：
中和DNA磷酸骨架的负电荷，减少电荷排斥力，促进DNA聚集沉淀
高盐浓度还可沉淀蛋白质杂质
柠檬酸钠（动物样本专用）：
防止血液凝固，辅助细胞裂解
4.去污剂：分离DNA与杂质
酚-氯仿-异戊醇混合液：
通过离心分层，蛋白质变性后沉淀于有机相，DNA保留在水相
异戊醇减少气泡生成
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）：
植物DNA提取中常用，结合多糖和酚类杂质，防止其干扰DNA
5.沉淀剂：浓缩纯化DNA
冷乙醇或异丙醇：
降低DNA溶解度，使其脱水沉淀为白色丝状物低温（-20℃）可提高沉淀效率并抑制酶活性
高浓度盐（如NaAc）：
与乙醇协同作用，加速DNA沉淀
6.辅助成分
葡萄糖：维持渗透压，防止细胞提前破裂
巯基乙醇：抗氧化剂，防止酚类氧化损伤DNA
能量物质（如ATP、氨基酸）：
在DNA合成反应中提供能量，但提取过程中作用较小
关键步骤中的协同机制
裂解阶段：SDS和蛋白酶K破坏膜结构，EDTA保护DNA
去蛋白阶段：酚-氯仿或高盐溶液分离杂质
沉淀阶段：冷乙醇+盐类使DNA选择性沉淀
注意事项
温度控制：冷乙醇和预冷试剂可减少DNA降解
避免污染：器材需无核酸酶处理，操作环境保持清洁
样本差异：植物需CTAB去除多糖，动物需防凝血剂
通过理解各成分的作用，可优化实验流程（如司法鉴定、植物基因分析），提高DNA提取效率与纯度
客服