一、样本质量问题
采集与保存不当
采集不规范：使用未消毒的采血针或未遵循标准流程（如未充分混匀血液）可能导致样本污染或DNA降解
保存条件不佳：血液样本暴露于高温、强光或潮湿环境，易导致DNA分子受损例如，全血样本反复冻融会加速DNA降解，而液氮保存可有效延长其稳定性
解决方案：严格遵循采样标准操作程序（如使用无菌针头），采集后立即低温保存（-80℃或液氮），避免反复冻融
样本量不足
全血中白细胞数量较低（如脐带血或白血病患者血液）可能直接影响基因组DNA的产量
解决方案：根据试剂盒要求调整样本量，必要时增加样本量或优化裂解条件
二、提取技术与试剂问题
试剂选择与操作失误
试剂质量差：低质量或不匹配的裂解缓冲液、蛋白沉淀液可能降低提取效率
操作不规范：离心速度、时间不足，或未充分混合裂解液与样本，导致DNA释放不完全
解决方案：选择信誉良好的试剂品牌，严格按照说明书操作，确保裂解液与样本充分混合并延长裂解时间
裂解不充分
样本未充分匀浆（如叶片或组织未充分研磨）或裂解液未完全覆盖样本，可能影响DNA释放
解决方案：使用液氮研磨或匀浆器，确保样本均匀破碎，必要时增加裂解液体积
三、纯化与纯度问题
纯化不彻底
未充分去除蛋白质、多糖等杂质，或洗脱步骤中乙醇残留，可能导致DNA浓度偏低
解决方案：增加纯化步骤（如多酚-氯仿法去除蛋白质），使用无水乙醇沉淀DNA并充分干燥去除残留杂质
DNA降解
样本中内源性核酸酶活性未被抑制，或操作过程中机械力损伤DNA，可能导致降解
解决方案：在裂解液中加入核酸酶抑制剂（如EDTA），避免剧烈操作，使用低温（4℃）保存样本
四、实验环境与操作规范
环境污染
实验室空气中的微生物或器材表面残留物可能引入交叉污染，降低DNA纯度
解决方案：保持实验室清洁，使用一次性耗材，定期消毒设备
操作者技能不足
经验不足的操作者可能因离心速度错误、洗脱体积不足等问题导致提取失败
解决方案：加强操作培训，建立标准化操作流程（SOP），并记录每一步操作参数
五、仪器与数据分析
检测方法局限性
低灵敏度检测方法（如分光光度计检测限为0.1ng/μL）可能无法检测低浓度DNA，导致误判
解决方案：采用高灵敏度检测方法（如qPCR）验证DNA浓度，必要时进行PCR扩增以提高灵敏度
比值异常
A260/A280比值偏离1.8（DNA纯度低）或A260/A230比值异常，可能反映杂质污染或DNA降解
解决方案：通过电泳或质谱分析进一步确认DNA完整性，必要时重新纯化
六、总结与建议
人血DNA提取浓度低的成因涉及样本质量、技术操作、试剂选择及环境控制等多个环节解决此类问题需采取系统性措施：
源头控制：规范采样与保存流程，确保样本新鲜度；
技术优化：选择高质量试剂，严格遵循操作规范；
质量监控：通过分光光度计、电泳等手段实时监测DNA浓度与纯度；
人员培训：提升操作者技能，减少人为误差
通过以上措施，可显著提高DNA提取效率，为后续分子生物学实验（如PCR、测序等）提供可靠的基础材料
客服