一、实验原理
溶解度差异
DNA在NaCl溶液中的溶解度随浓度变化：
低于0.14 mol/L时，溶解度随浓度升高而降低；
在0.14 mol/L时，溶解度最低（此时DNA易析出）；
高于0.14 mol/L时，溶解度重新升高。
这一特性用于分离DNA与溶解度不同的杂质（如蛋白质、RNA）。
鉴定原理
DNA与二苯胺试剂在沸水浴中反应，生成蓝色化合物。这是验证DNA存在的关键依据。
二、实验材料选择
动物材料：鸡血细胞（含高浓度DNA且细胞膜易破裂）。
植物材料：洋葱、花菜等（需研磨破坏细胞壁，并加入洗涤剂溶解细胞膜）。
抗凝剂：柠檬酸钠防止血液凝固。
三、实验步骤
破碎细胞
动物细胞：加入蒸馏水使细胞吸水胀破。
植物细胞：研磨后加入洗涤剂（如SDS）溶解细胞膜。
去除杂质
盐析法：调节NaCl溶液浓度（如0.14 mol/L）使DNA析出，过滤后去除溶解的蛋白质。
酶解法：加入嫩肉粉（含蛋白酶）分解蛋白质。
高温法：DNA耐高温，而蛋白质高温变性后可通过离心去除。
DNA析出
加入预冷的体积分数95%酒精，DNA因不溶于酒精而析出白色丝状物。
纯化与鉴定
纯化：反复溶解（2 mol/L NaCl）与析出（稀释或加酒精）以提高纯度。
鉴定：将提取物与二苯胺试剂混合，沸水浴后观察是否变蓝。
四、注意事项
操作轻柔：搅拌或转移时避免剧烈震动，防止DNA断裂。
试剂现配：二苯胺试剂需新鲜配制，否则影响显色效果。
温度控制：低温（如4℃）可抑制DNA酶活性，减少DNA降解。
材料预处理：鸡血需离心去除血浆（血浆不含DNA）。
五、实验延伸
不同材料对比：洋葱、香蕉等植物DNA含量差异可能影响提取量。
虚拟实验：在线平台（如NB生物实验）可模拟操作步骤，辅助学习。
高纯度提取：实验室常用CTAB或SDS进一步去除多糖、脂质等杂质。
六、常见问题
为何使用冷酒精？低温降低DNA溶解度，促进析出。
洗涤剂的作用？溶解细胞膜，释放核DNA。
反复溶解-析出的意义？逐步去除杂质，提高纯度。
客服